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使用BD流式細(xì)胞儀分析的主要目的在于區(qū)分細(xì)胞對于檢測指標(biāo)是陽性還是陰性,或計算陽性細(xì)胞與陰性細(xì)胞的比例。這就需要準(zhǔn)確的儀器設(shè)置及良好的實驗重復(fù)性,分析時運(yùn)用恰當(dāng)對照及分析方法。各種不同的流式細(xì)胞儀實驗需要不同的陰性對照,因而也是一些爭論及討論的焦點。
在BD流式細(xì)胞儀實驗中為基礎(chǔ)的問題是哪些染色的細(xì)胞是陽性或陰性,或?qū)τ谀骋粯?biāo)志物陽性細(xì)胞或陰性細(xì)胞的比例是多少。要回答這個問題需要仔細(xì)調(diào)節(jié)儀器并使用對照品。
首先,探測器的增益需調(diào)節(jié)準(zhǔn)確從而獲得佳的靈敏度,熒光補(bǔ)償必須設(shè)置正確,從而避免出現(xiàn)虛假或不必要的錯誤結(jié)果。
第二,對于沒有明顯雙峰分布(陽性峰)的樣本,需要做設(shè)門對照。在某些情況下,生物比較樣本(如未刺激的細(xì)胞)可提供佳的設(shè)門對照來決定細(xì)胞陽性范圍。在某些不可能獲得生物比較樣本的情況下,可使用同型對照或FMO對照。以上這些并不是所有的選擇,選擇何種方式取決于是熒光滲漏或抗體非特異性結(jié)合對實驗的影響大小。初,可通過檢測多種對照來決定哪一個更適合于定義陽性、陰性界線。在任何實驗中都須避免因為沒有充分考慮而使用不恰當(dāng)?shù)膶φ掌?。堅持使用?jīng)實驗證明的設(shè)門方法將有助于標(biāo)準(zhǔn)化BD流式細(xì)胞儀分析項目來解答重要的臨床問題。
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